Cancer?Cell丨RAS-GTP抑制在膽管癌中表現出抗癌活性

撰文丨章臺柳

KRAS 癌基因是人類中突變最廣泛的癌基因之一，也是肺癌、結直腸癌和胰腺癌的關鍵驅動因素。 KRAS 突變也發生在一些不那么普遍但同樣致命的癌癥中，例如膽道癌、食管癌、子宮內膜癌、胃癌、卵巢癌和宮頸癌，但這些癌癥對異常 KRAS 信號通路的依賴性尚不明確 。

膽管癌（CCA） 是一組來源于膽道的異質性癌癥，分為肝內膽管癌、肝門周圍膽管癌（兩者也稱為肝外膽管癌）或遠端膽管癌。全球范圍內，膽管癌的發病率正在上升，目前約占所有原發性肝癌的 15% 和胃腸道惡性腫瘤的 3% 。唯一的治愈性選擇是手術，但僅限于局部膽管癌患者。盡管晚期膽管癌的治療取得了進展，包括將免疫治療納入基于化療的標準治療方案，但由于其診斷時已是晚期以及對常規治療的耐藥性，膽管癌的預后仍然很差。對膽管癌基因組圖譜的精細探索揭示了癌基因（如 KRAS 、 IDH1/2 、 BRAF 或 PI3K ）和抑癌基因（如 TP53 、 ARID1A 、 BAP1 或 SMAD4 ）的突變，以及其他致癌驅動因子（如 FGFR 和 ERBB2 ）的易位和擴增，這導致了針對 FGFR2 融合和 IDH1 突變亞群的靶向療法的開發和臨床批準。其他基因組亞群，例如那些攜帶 KRAS 突變的亞群，是否可能從 RAS(ON) 多選擇性抑制劑 （ 這類抑制劑能夠靶向經典 RAS 亞型突變型和野生型變體的活性、 GTP 結合狀態 ） 等靶向療法中獲益，仍有待探索。

KRAS 是膽管癌中最常發生突變的癌基因之一，約四分之一的患者存在突變。無論解剖位置如何， KRAS G12D 等位基因突變在膽管癌中最為普遍，而在肝外膽管癌中觀察到第 12 密碼子（如 G12C ）或第 13 密碼子（如 G13D ）的其他突變，在肝內膽管癌中檢測到第 61 密碼子（如 Q61H ）的突變。 KRAS 突變與基因組亞群中最差的臨床結局相關。致癌 KRAS 信號對膽管癌發生的基本貢獻最初是通過在基因工程小鼠模型中肝臟特異性表達突變 Kras 等位基因以及通過水動力尾靜脈注射遞送的基于轉座子的系統得以證實的。鑒于 RAS(ON) 多選擇性抑制劑 可 靶向在膽管癌中發現的 KRAS 突變等位基因，因此 有必要 在臨床前模型中對這些廣譜抑制劑進行系統評估，對于描繪其在患者中臨床實施的路線圖至關重要。

來自 納瓦拉大學應用醫學研究中心 的 Silve Vicent 、 Rodrigo Entrialgo-Cadierno 和來自美國革命醫藥公司的 Jingjing Jiang 團隊 在 Cancer Cell 雜志上發表文章 Anticancer activity of RAS-GTP inhibition in cholangiocarcinoma ，在臨床前模型及KRAS突變型CCA患者中研究了RAS（ON）多選擇性抑制劑的活性。RAS(ON) 多選擇性抑制劑在細胞來源和患者來源的異種移植模型以及免疫完整同種移植模型中均產生了強效的抗癌反應。與這些臨床前發現一致，兩例晚期 KRAS G12 CCA 患者在接受 RAS(ON) 多選擇性抑制劑達拉索西布（ daraxonrasib ）治療后 表現出 臨床活性。抑制RAS-GTP還能增強當前CCA標準治療方案在細胞來源的人源異種移植模型和小鼠同種移植模型中的活性，從而延長生存期。此外， 揭示了 內在獲得性及對 RAS(ON) 多選擇性抑制劑的獲得性耐藥性主要依賴于驅動 RAS 信號 再 激活的機制。總而言之， 這項研究的 發現表明KRAS突變型CCA的增殖依賴于RAS信號，并支持在CCA中進行RAS-GTP抑制的潛在臨床評估。

研究人員 在多株人 KRAS 突變型和野生型細胞系以及永生化非癌性人膽管細胞中測試了 RMC-7977 （一種代表研究性藥物達拉索西布的藥理特性、可用于臨床前研究的工具化合物） 。 RMC-7977 對 KRAS 突變型細胞系 的生長抑制 比在野生型等位基因細胞系中高 50 倍 。 RMC-7977 對 從患者來源異種移植獲得的有 KRAS 突變的膽管癌細胞系 以及小鼠模型細胞系同樣具有高水平的抑制能力。蛋白水平分析顯示， RMC-7977 能夠持久抑制 RAS 通路 ，并 導致了凋亡的誘導，表現為裂解的 caspase 3 表達增強，并隨抑制劑濃度和處理時間的增加而增加。 即證明了 膽管癌細胞系對致癌 RAS 信號通路的依賴性。

研究人員評估了 RMC-7977 在體內膽管癌模型中的抗腫瘤效應 。 使用了四種細胞來源異種移植模型（ EGI.1 、 HUCTC1 、 SNU-869 和 KKU-213A ）和五種患者來源異種移植模型（ PDX41 、 PDX120 、 CTG-0011 、 CTG-1480 和 LIV-254 ）， 都觀察到顯著的抗腫瘤活性。分析藥代動力學與 RAS 信號抑制 （通過 KRAS-MAPK 轉錄靶點 DUSP6 的 mRNA 定量） 之間的關系，結果表明兩者具有相關性，表現出對 RAS 信號傳導具有相似的依賴性。 KRAS 突變型膽管癌細胞的體內生長依賴于激活的 KRAS 信號傳導，與 KRAS 驅動的其他癌癥（如非小細胞肺癌和胰腺導管腺癌）相當。 同時在免疫完整的小鼠中分別使用 KPh 、 hKP 和 iAKP 細胞系建立皮下模型， RMC-7977 在 KPh 和 hKP 模型中都誘導了持續的腫瘤消退， 但 在治療開始后約 25 天觀察到腫瘤復發 。 RMC-7977 處理顯著抑制 iKAP 模型的腫瘤生長。進一步分析顯示， iAKP 細胞中存在多個突變 Kras 拷貝，并且在持續 RMC-7977 治療一個月后，這些拷貝發生了進一步擴增 。 這種 Kras 擴增同時表現為均勻染色區和染色體外 DNA ，且 這種基因組擴增是突變 Kras 等位基因所特有的 。

為了進一步 探索 RAS-GTP 抑制的 應用 轉化潛力， 研究人員 在 3 種模型中 評估了 RMC-7977 與化療（ CT ：吉西他濱和順鉑）、免疫治療（ IT ：抗 PD-1 ）或模擬局部晚期或轉移性膽管癌標準治療方案的三聯療法（ CT/IT ）的組合 的抗腫瘤功效 。 相比于單藥治療，無論是 RMC -7977+ CT ，還是 RMC -7977+ CT + IT 均顯著提升抗腫瘤治療效果，延長無進展生存期，且不影響小鼠體重。 這些臨床前結果表明，在 KRAS 突變型膽管癌中， RAS(ON) 多選擇性抑制劑與標準治療方案聯合應用可能比單藥產生更持久的抗癌反應。 同時， 評估達拉索西布單藥治療既往經治的晚期實體瘤患者安全性、耐受性和初步活性的首次人體臨床試驗 開始招募，并報道了兩例晚期 KRAS G 12 膽管癌患者接受治療后表現出臨床活性，提示 潛在 的臨床療效。

研究人員對 RMC -7977 處理后引起的基因表達和蛋白水平變化進行評估。 RMC-797 7 誘導的轉錄變化與致癌 KRAS 信號通路的消除高度一致，其特征是已建立的 KRAS 突變基因表達特征的逆轉 。 典型的 KRAS 效應因子，包括轉錄調節因子 MYC 和 FOSL1 ，被顯著抑制。 GO 分析顯示，下調的生物學通路富集了增殖和生存軸，包括 E2F 和 MYC 靶點、 DNA 修復、 PI3K-AKT-mTOR 信號傳導、未折疊蛋白反應和 IL2-STAT5 信號傳導。相反，上調的生物學通路包括干擾素 -γ 和 IFNα 反應、缺氧和上皮 - 間充質轉化 （ EMT ） 。由于 EMT 已被認為是等位基因特異性 KRAS 抑制劑適應性耐藥的機制， 結果 表明這些補償程序在治療后 24 小時就已啟動。 蛋白水平方面， RMC -7977 處理導致 SHP2 激活顯著增加， HRAS 和 MRAS 過表達 ，且在小鼠和人膽管癌臨床前模型中保守，在體外和體內保持一致。即 對 RAS(ON) 多選擇性抑制的分子反應是高度保守的。 鑒于 SHP 2 激活的顯著增加，研究人員 評估了通過同時抑制 RAS-GTP （ RMC-7977 ）和 SHP2 （ RMC-4550 ）來“加倍打擊” RAS 通路的治療潛力。 體外和體內模型都顯示，兩者的聯用具有協同效果，使獲得性耐藥出現的時間延長了一倍，可以控制對 RMC-7977 內在耐藥 的腫瘤生長，延長總生存期。表明 最大化 RAS 通路抑制 在 克服膽管癌中的致癌信號通量和耐藥性 的潛力。

總的來說，這項研究確定了KRAS突變型膽管癌對RAS的基本依賴性，并對廣譜RAS-GTP抑制劑達拉索西布作為單藥或聯合用藥進行全面的臨床前和臨床評估，揭示出其應用于KRAS突變型膽管癌治療的潛力。

原文鏈接：https://www.cell.com/cancer-cell/fulltext/S1535-6108(26)00174-1

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