Commun Biol (1區) I 小花清風藤新化合物 Sabinineoside B 靶向 PPARα 改善代謝相關脂肪性肝病（江西中醫藥大學李志峰...

2026年4月21日，江西中醫藥大學李志峰、王琦及復旦大學藥學院陳道峰團隊在Communications Biology（中科院1區，IF=5.1）預發表題為 “Sabinineoside B alleviates metabolic dysfunction-associated steatotic liver disease by targeting PPARα” 的研究論文。

該研究從傳統中藥小花清風藤（Sabia parviflora）中分離得到一種新的菲類生物堿苷化合物Sabinineoside B（H4），并系統揭示其改善代謝功能障礙相關脂肪性肝病（MASLD）的藥效基礎和分子機制。MASLD 過去被稱為非酒精性脂肪性肝病（NAFLD），是當前全球常見的慢性肝病之一，其核心病理特征包括肝臟脂質異常沉積、脂毒性損傷、氧化應激和代謝紊亂。現有治療手段仍較有限，因此尋找安全有效、機制明確的新型干預分子具有重要意義。

本研究通過建立高脂飲食誘導的 MASLD 小鼠模型，發現 Sabinineoside B 能顯著降低小鼠體重，改善肝組織脂滴沉積和肝細胞損傷，并調節血脂、肝功能及氧化應激相關指標，提示其具有明確的保肝和降脂活性。進一步結合代謝組學、蛋白質組學和磷酸化蛋白質組學分析，研究團隊發現 Sabinineoside B 的作用主要集中于 PPAR 信號通路、不飽和脂肪酸生物合成、膽汁分泌和過氧化物酶體通路，并與脂肪酸氧化、膽汁酸代謝和能量代謝密切相關。

機制研究顯示，Sabinineoside B 可上調 PPARα、FXR、CPT1A、CPT2、EHHADH、CYP7A1、AKR1D1 和 ABCB11 等脂質代謝及膽汁酸代謝相關蛋白，同時降低 PLTP、PLIN2、ABCG8 等促脂質蓄積相關蛋白表達，從而促進脂肪酸氧化、改善膽汁酸代謝并減少肝臟脂質負荷。在 HepG2 高脂細胞模型中，Sabinineoside B 同樣能夠降低細胞內甘油三酯水平和脂滴積累，進一步驗證了其細胞水平的降脂作用。

值得注意的是，研究團隊通過分子對接、500 ns 分子動力學模擬、pull-down、CETSA、DARTS 和雙熒光素酶報告實驗等多種手段證實，Sabinineoside B 可直接結合 PPARα 蛋白，并表現出相對選擇性。siRNA 敲低 PPARα 后，Sabinineoside B 對脂滴積累、甘油三酯水平以及 PPARα 下游脂質代謝蛋白的調控作用明顯減弱，說明其改善 MASLD 的關鍵機制依賴于 PPARα 激活。

此外，研究還初步評價了 Sabinineoside B 的藥代動力學和急性毒性。結果顯示，該化合物在一定劑量范圍內呈劑量依賴性藥代動力學特征，急性給藥后未觀察到明顯死亡或主要器官病理異常。不過，其口服絕對生物利用度較低，提示后續仍需通過制劑優化或結構改造提升體內暴露水平。

總體來看，該研究不僅發現了來源于小花清風藤的新型活性天然產物 Sabinineoside B，也明確提出其通過靶向 PPARα—脂質代謝—膽汁酸代謝軸 改善 MASLD 的作用模式。該成果為天然產物干預 MASLD 提供了新的候選分子和實驗依據，也進一步強調了 PPARα 作為 MASLD 治療靶點的開發價值。

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【摘要】

隨著代謝功能障礙相關脂肪性肝病（metabolic dysfunction-associated steatotic liver disease, MASLD）患病率不斷上升，開發針對該疾病的新型藥物尤為迫切。Sabinineoside B是一種從傳統中藥小花清風藤（Sabia parviflora）中分離得到的新型菲類生物堿苷類化合物。

本研究通過建立高脂飲食小鼠模型，并整合代謝組學、蛋白質組學和磷酸化蛋白質組學分析，闡明了 Sabinineoside B 治療 MASLD 的藥效及作用機制，同時對其藥代動力學和安全性進行了初步評價。

本研究采用分子對接、分子動力學模擬、藥物親和反應靶標穩定性實驗（DARTS）、細胞熱轉移實驗（CETSA）、pull-down、雙熒光素酶報告基因實驗以及 siRNA 技術，驗證 Sabinineoside B 與關鍵靶標之間的結合關系。結果表明，Sabinineoside B 能顯著減少高脂飲食小鼠的脂質沉積和肝損傷。整合多組學分析和 Western blot 實驗顯示，Sabinineoside B 通過調節 PPARα 信號通路調控脂質代謝并發揮降脂作用。敲低 PPARα 會削弱 Sabinineoside B 對降脂通路的調控作用，提示 Sabinineoside B 發揮降脂活性的分子機制可能是通過靶向 PPARα 實現的。

關鍵詞：新化合物；MASLD；多組學；siPPARα；脂質代謝

01

研究背景及科學問題

代謝功能障礙相關脂肪性肝病（MASLD），既往稱為非酒精性脂肪性肝病（NAFLD），是全球范圍內高度流行的肝臟疾病，也是導致肝硬化和肝癌的重要因素。除健康生活方式和減重外，MASLD 的預防和治療還需要尋找用于識別高危人群的診斷及預后生物標志物，并開發有效藥物。

目前研究認為，MASLD 的惡化與異常的異位脂質沉積密切相關。體內過量脂肪儲存會導致組織和器官內分泌功能改變。異位脂肪積累參與脂毒性代謝應激的發生，隨后引起肝臟、骨骼肌等器官的代謝受損和輕度炎癥。在這一背景下，過氧化物酶體增殖物激活受體（PPARs）作為存在于肝臟、骨骼肌和脂肪組織中的核激素受體，主要受脂肪酸及其代謝物刺激。PPAR 家族包括PPARα、PPARγ 和 PPARβ/δ三種亞型，可通過 PPAR 信號通路積極調節 MASLD 相關的多種紊亂生物過程，包括炎癥、脂質和葡萄糖代謝以及整體能量穩態。

此外，膽汁酸已被發現能夠調節肝臟穩態。法尼醇 X 受體（FXR）和維生素 D 受體等膽汁酸受體的發現，使人們進一步認識到膽汁酸相關通路參與肝病及膽汁淤積以外疾病，例如 MASLD 的發生發展。目前正在開發的 MASLD 治療藥物主要靶向四類通路。減少肝臟脂肪蓄積及其導致的代謝應激，被認為是治療 MASLD 最關鍵的途徑。例如，elafibranor和saroglitazar分別作為 PPARα/δ 和 PPARα/γ 雙重激動劑，能夠通過 PPAR 信號通路調控 PPARs 的活性。

小花清風藤（Sabia parviflora Wall. ex Roxb., SP）為清風藤科雙子葉植物，分布于中國廣西、貴州和云南，自古以來在臨床上用于治療黃疸和肝炎。目前已從 SP 及其同屬植物的全草、根皮、莖和葉中提取得到生物堿、五環三萜、黃酮、苯丙素類等化學成分。通過對 SP 及其化學成分的研究，人們發現了其保肝作用。

本研究團隊首次從 SP 中分離得到一種新化合物 Sabinineoside B，簡稱 H4。該化合物為菲類生物堿苷類化合物，相關內容已獲得專利保護。生物堿是清風藤科植物的主要活性成分。研究團隊通過核磁共振（NMR）和質譜分析確認了該化合物結構。

因此，本研究旨在探討 H4 對 MASLD 的藥效，以及 PPARα 信號在 H4 調控 MASLD 過程中的作用。結果顯示，H4 能減少肝臟脂質積累。尤其是，H4 可通過與 PPARα 直接結合緩解 MASLD 進展，提示其作為治療 MASLD 的天然產物具有潛在應用價值。

02

重要發現及亮點

新化合物 Sabinineoside B 的結構表征（圖 1A）

本研究從小花清風藤中分離得到 2.4 g 新型菲類生物堿苷化合物 H4（圖 1A），并對其結構進行了分析。DAPG，又稱 H4，為黃色粉末。HR-ESI-MS 顯示其分子離子峰 m/z 為 444.2010（[M + H]+，C24H29NO7 理論值 444.2015），確定其分子式為 C24H29NO7。

H4 的 1H NMR 譜顯示出兩個相鄰亞甲基信號，以及四個復雜偶合的芳香質子信號。其中 δH 9.84 為菲類生物堿 C-5 位質子的特征性低場信號。葡萄糖端基質子信號為 4.87（1H, d, J = 7.98 Hz），提示其為 β 構型。13C-NMR 譜顯示 24 個碳信號，包括兩個甲基碳、兩個亞甲基碳、14 個芳香碳和 6 個葡萄糖碳。14 個芳香碳信號確認其具有菲骨架。

C-3 位化學位移向低場移動，提示羥基連接于 C-3。HMBC 譜顯示 δH 2.27（s, 6H）與 δC 60.7（C-12）相關，提示存在 -CH2-CH2-N-(CH3)2 結構。端基質子信號 4.87 與 C-4 相關，提示葡萄糖連接于 C-4。H-11 的氫信號與 C-1、C-2 和 C-10a 相關，提示含氮基團連接于 C-1。結合 HMBC、HSQC 等二維 NMR 數據，最終確定該化合物結構為 1-[2-(dimethylamino) ethyl]-3,4-phenanthrenediol-4-O-β-D-glucose，并命名為 H4。其 UV（MeOH）λmax 為 254.2 nm。

圖 1. H4 可改善高脂飲食誘導的小鼠肝脂肪變性

(A) 新化合物 H4 的化學結構，以及獲取代謝譜和多組學數據的工作流程示意圖。
(B) 小鼠實驗分組。
(C) H4 對高脂飲食喂養小鼠體重的影響。結果以平均值 ± 標準差表示（n = 8）。
(D) 對肝組織進行 H&E 染色（n = 8）和油紅 O 染色（n = 8）。在光學顯微鏡下進行組織病理學分析（10× 和 40× 放大倍數）。
(E) H4 對高脂飲食小鼠血清 AST、ALT、ALP、LDH、GGT、TC、TG、HDL-c、LDL-c，以及肝臟 MDA、SOD、GSH 水平的影響。結果以平均值 ± 標準差表示（n = 8）。
*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001，與 HFD 組相比。p < 0.05 表示差異具有統計學意義；ns 表示無顯著性差異。

Sabinineoside B 減輕高脂飲食誘導的小鼠肝損傷和氧化應激（圖 1B–E）

本研究按照圖 1B 所示方案，探討新化合物 H4 緩解 MASLD 的作用及機制。如圖 1C 所示，與對照組小鼠相比，高脂飲食組小鼠體重顯著升高。與高脂飲食組相比，H4 低、中、高劑量組（3、10 和 30 mg/kg/day）以及非諾貝特組（60 mg/kg/day）小鼠體重均顯著降低。

同時，H&E 染色和油紅 O 染色結果顯示，H4 顯著改善了高脂飲食小鼠肝細胞中的空泡樣脂滴和肝索排列紊亂（圖 1D）。這一結果也得到血清 TC、LDL-c、HDL-c 和 TG 等生化指標變化的支持（圖 1E）。此外，H4 顯著改善了高脂飲食小鼠血清 AST、ALT、ALP、LDH、GGT 以及肝臟 MDA、SOD 和 GSH 水平（圖 1E）。這些結果表明，H4 能夠緩解高脂飲食小鼠肝臟脂質積累。

Sabinineoside B 處理對高脂飲食小鼠肝臟代謝物的影響（圖 2A–F）

為全面考察 H4 對肝臟代謝物的影響，本研究開展了肝臟代謝組學分析。主成分分析、樣本相關性分析、MCC 分析、PLS-DA 模型和 OPLS-DA 模型檢測結果顯示，對照組、高脂飲食組和 H4 組之間存在統計學差異（圖 2A–C，補充圖 2，補充表 2）。

圖 2. H4（30 mg/kg）對高脂飲食小鼠代謝物影響的代謝組學分析

(A) PCA 得分圖，包括 Ctrl、HFD 和 H4 組在不同 ESI 模式下的結果。
(B) Ctrl、HFD 和 H4 組之間 OPLS-DA 得分比較，并通過置換檢驗（200 次置換）對相應 OPLS-DA 模型進行統計驗證。
(C) Ctrl、HFD 和 H4 組之間 PLS-DA 得分比較，并通過置換檢驗（200 次置換）對相應 PLS-DA 模型進行統計驗證。
(D) 差異代謝物（DMs）分布的維恩圖。不同組合共有和特異的差異代謝物數量分別顯示在重疊區域和非重疊區域。
(E) 各類代謝物數量占所有差異代謝物比例的餅圖。根據差異代謝物類別繪制熱圖，紅色表示水平較高，藍色表示水平較低。
(F) 兩組比較（HFD vs. Ctrl 和 H4 vs. HFD）中脂質和脂肪酸濃度顯著變化的熱圖。

總體來看，高脂飲食小鼠肝臟中多類代謝物發生明顯變化，包括有機酸及其衍生物、脂質及脂質樣分子、核苷、核苷酸及其類似物等。H4 處理后檢測到的脂質和脂肪酸占比為 17.00%，其中脂酰類占 11.34%（圖 2D）。

肝組織代謝組學分析顯示，高脂飲食組與對照組之間共有 86 個差異代謝物，其中 43 個上調、43 個下調。H4 干預后的高脂飲食組與高脂飲食組之間共有 66 個差異代謝物，其中 20 個上調、46 個下調。兩組比較中共有 41 個共同差異代謝物，包括鵝脫氧膽酸、牛磺鵝脫氧膽酸、2E-二十碳烯酸、α-亞麻酸、脫氧膽酸、二十碳五烯酸、1-硬脂酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿和牛磺膽酸等脂肪酸、脂質和膽汁酸代謝物。熱圖結果顯示，H4 可顯著逆轉脂質代謝相關代謝物水平（圖 2F）。這些結果表明，H4 能調節 MASLD 小鼠肝臟代謝物變化。

Sabinineoside B 處理對高脂飲食小鼠肝臟蛋白和磷酸化蛋白水平的影響（圖 3A–B，補充圖 3，補充表 4–5）

蛋白質組學數據顯示，高脂飲食組與對照組之間存在 1201 個差異蛋白，H4 組與高脂飲食組之間存在 875 個差異蛋白（補充表 4）。磷酸化蛋白質組學數據共識別出 2911 個磷酸化蛋白、7608 條磷酸化肽和 8876 個磷酸化位點。分析結果表明，本研究用于后續分析的蛋白質組學和磷酸化蛋白質組學數據質量良好（補充圖 3A–C）。

圖 3. H4 對高脂飲食小鼠蛋白質組和磷酸化蛋白質組影響的分析

(A) 兩個比較組（HFD vs. Ctrl 和 H4 vs. HFD）中蛋白質組和磷酸化蛋白質組差異蛋白（DPs）亞細胞定位的柱狀圖。
(B) 對全部鑒定到的 5374 個蛋白和 7608 條磷酸化肽進行層次聚類分析的熱圖，其中包括組間無顯著差異的蛋白和修飾肽（一元方差分析）。紅色表示水平較高，藍色表示水平較低。
(C) 根據差異蛋白和差異修飾蛋白（DMPs）的 FC 值繪制熱圖，反映蛋白水平及其磷酸化修飾水平的一致性。“P”表示蛋白，“PP”表示與修飾肽對應的蛋白。
(D) 兩個比較組（HFD vs. Ctrl 和 H4 vs. HFD）中總蛋白質組與磷酸化蛋白質組的散點圖。橫坐標 FC_P 表示蛋白的倍數變化值；縱坐標 FC_MP 表示修飾肽對應蛋白的倍數變化值。灰色點表示差異不顯著的蛋白（p > 0.01）。圖中標注了值得關注的蛋白。
(E) 參與五條最顯著 KEGG 通路的差異蛋白 PPI 網絡圖。圓形節點表示差異蛋白，連線表示蛋白—蛋白相互作用。圓形顏色表示差異蛋白表達情況（藍色表示下調，紅色表示上調），圓形大小表示該蛋白的連接度。連接度更高的蛋白可能對維持系統穩態和穩定性更為關鍵。

亞細胞定位分析顯示，大多數差異蛋白定位于細胞質、線粒體、質膜和細胞核，尤其是在 H4 組與高脂飲食組的比較中更為明顯（圖 3A）。這提示大量差異蛋白主要分布于細胞核和細胞質中。圖 3B 展示了所有鑒定到的 5374 個蛋白和 7608 條磷酸化肽。火山圖顯示，H4 可顯著回調高脂飲食導致的蛋白和磷酸化蛋白水平變化（補充圖 3D）。

本研究進一步僅納入可被 H4 顯著逆轉的高脂飲食誘導差異蛋白或差異修飾蛋白進行后續分析。為驗證 TMT 結果，研究者采用 PRM 對 18 個候選蛋白進行定量分析（補充表 5）。盡管 CPT1A、CD36、HMGCS1、ACOX1 和 FADS2 的 PRM 結果未顯示顯著差異，但其在兩組比較中的調控趨勢與 TMT 結果一致。PLIN2 和 SLC22A7 在三個重復樣本中未被檢測到。其余 13 個蛋白，包括 CYP4A14、ME1、HMGCS2、ACAA1B、CYP4A10、ACAA1A、ABP1、DBI、FABP2、EHHADH、CSAD 和 ACOX1 等，其變化趨勢與 TMT 結果一致。綜上，PRM 結果證實了 TMT 實驗數據的可靠性，支持其用于進一步分析。

Sabinineoside B 對差異代謝物、差異蛋白和差異磷酸化蛋白生物信息學特征的影響（圖 3C–E，圖 4A–H）

為識別本研究中的樞紐蛋白，研究者對定量蛋白和基序蛋白進行關聯分析，并在 HFD vs Ctrl 和 H4 vs HFD 數據集中分別獲得 1940 組相關蛋白。熱圖結果顯示，大多數相關蛋白的表達水平及其磷酸化修飾呈相同變化趨勢（圖 3C）。

研究者根據差異倍數、蛋白表達是否顯著以及關注的差異蛋白繪制圖 3D，并識別出 EHHADH、ACOT1 和 ACAA1B 等關鍵差異蛋白。在相互作用蛋白中（圖 3E），ABCB11、ACOX1、AKR1D1、ACOT1、FASN、ACAA1A/B、EHHADH、CSAD 和 PLIN2 等蛋白在 H4 組與高脂飲食組之間發生顯著改變。這些蛋白在脂質代謝、膽汁酸代謝和能量代謝等生物過程中發揮重要作用。

研究者對所有差異蛋白和差異修飾蛋白進行了火山圖分析（補充圖 3D），并分別從 BP、CC 和 MF 中選擇富集差異蛋白和差異修飾蛋白最多的 15 條通路（補充圖 3E）。此外，還對差異蛋白和差異代謝物進行了 Pearson 相關性分析和層次聚類分析（補充圖 3F、3G），進一步基于識別出的差異蛋白、差異代謝物和差異修飾蛋白開展通路富集分析。

所有 KEGG 通路統計結果顯示，相關通路主要富集于 PPAR 信號通路、不飽和脂肪酸生物合成、膽汁分泌和過氧化物酶體通路（圖 4A）。進一步對富集的差異代謝物和差異蛋白進行聯合網絡富集分析（圖 4B）發現，兩者之間聯系緊密。主要差異蛋白包括 CD36、ACOX1、FADS2、FABP1、CPT1A、CPT2、CYP4A11、PLIN2、HMGCS1/2、SLC27A5、HSPA1B、ABCG5、ABCG8、ABCB11、CYP7A1、AKR1D1、ME1、AKR1C2、CYP7B1、AKR1C1、ACAA1A、HSD17B4、SLC22A7 和 ABCC3 等；主要差異代謝物包括膽酸、肉豆蔻酸、十二烷酸、二十碳五烯酸、亞麻酸、辛酸、油酸和花生四烯酸等。

圖 4. 多組學數據的生物信息學分析

(A) “HFD vs. Ctrl”和“H4 vs. HFD”中顯著富集的前 10 條 KEGG 通路。高亮通路為研究關注的顯著富集通路。Y 軸表示 KEGG 通路，X 軸表示 rich factor，即差異代謝物、差異蛋白和差異修飾蛋白數量占該通路總注釋數量的比例。低 p 值（p < 0.05）用紅色圓圈表示，高 p 值（p > 0.05）用白色圓圈表示。圓圈面積表示差異代謝物、差異蛋白和差異修飾蛋白的數量。
(B) 基于 KEGG 數據庫的所有差異代謝物和差異蛋白網絡分析。
(C) 代謝物（甘油磷脂和脂肪酰類）相對變化趨勢的箱線圖。“*”表示組間代謝物差異的顯著性水平（*p < 0.05，**p < 0.01，**p < 0.001）。
(D) PPAR 信號通路和 β-氧化過程的簡化模型。矩形表示差異蛋白（紅色字體表示關注蛋白并以粗體顯示）；橢圓表示蛋白磷酸化位點（最高位點概率）；填充顏色深淺由 log2FC 值大小決定（灰色表示未檢測到該蛋白）。
(E) 對參與 PPAR 信號通路的差異蛋白和差異代謝物進行 Pearson 相關性分析。熱圖中每一行表示一個顯著差異代謝物，每一列表示一個顯著差異蛋白。每個網格包含兩類信息：相關系數 r 和 p 值。相關系數 r 用顏色表示：r > 0.8 表示正相關，用紅色表示；r < 0.8 表示負相關，用藍色表示；黃色表示 |r| < 0.8。p 值反映相關性的顯著性水平，p < 0.05 用 * 表示。
(F) 代謝物（類固醇及其衍生物）相對變化趨勢的箱線圖。“”表示組間代謝物差異的顯著性水平（*p < 0.05）。
(G) 小鼠初級膽汁酸生物合成過程的簡化模型。矩形表示差異蛋白（紅色字體表示關注蛋白）；橢圓表示蛋白磷酸化位點（最高位點概率）；填充顏色深淺由 log2FC 值大小決定（灰色表示未檢測到該蛋白）。
(H) 對參與初級膽汁酸生物合成和分泌的差異蛋白及差異代謝物進行 Pearson 相關性分析。熱圖中每一行表示一個顯著差異代謝物，每一列表示一個顯著差異蛋白。每個網格包含相關系數 r 和 p 值兩類信息。相關系數 r 用顏色表示：r > 0.8 表示正相關，用紅色表示；r < 0.8 表示負相關，用藍色表示；黃色表示 |r| < 0.8。p 值反映相關性的顯著性水平，p < 0.05 用 * 表示。

進一步分析顯示，H4 顯著降低甘油磷脂和脂酰基等脂質相關代謝物水平（圖 4C）。研究者聚焦 PPAR 信號通路，并對與脂肪酸代謝相關的富集代謝物和蛋白進行綜合分析。結果顯示，H4 顯著降低 PLTP、ACOX1、ACAA1A、ACAA1B 和 SCP2 表達，而對 CD36、FABP1、CD38 和 DBI 等蛋白影響有限（圖 4D）。此外，研究者對脂質和脂肪酸代謝物及其在 PPAR 信號通路中的相關蛋白進行相關性分析（圖 4E），結果顯示，H4 對高脂飲食誘導的小鼠肝臟脂質代謝通路中 ACSL3、ACSL4 等相關蛋白水平具有一定調控作用。

同時，對富集的 PPAR 信號通路和膽汁酸生物合成通路進一步分析發現，H4 顯著恢復膽汁酸代謝物水平（圖 4F），并明顯調控整個通路中相關蛋白表達，如 PPARα、FXR、CYP7A1、CYP7B1、AKR1D1、ABCG8 和 ABCB11（圖 4G）。這些發現與膽汁酸生物合成通路中代謝物和蛋白相關性分析結果一致（圖 4H）。

Sabinineoside B 對 MASLD 小鼠肝臟 PPAR 信號通路的影響（圖 5A–B）

為闡明 H4 緩解 MASLD 的機制，并驗證組學富集分析所識別的信號通路，研究者采用 q-PCR 測定預測蛋白編碼基因的表達水平，并通過 Western blot 分析關鍵蛋白。

結果顯示，H4 顯著上調 FXR、SHP、CYP7A1、EHHADH、CPT1A、ACADM、CYP4A10 和 CYP4A14 的 mRNA 表達，同時下調 SREBP-1C 和 CD36 的 mRNA 水平。在蛋白水平上，H4 明顯升高 PPARα、FXR、CPT1A、CPT2、EHHADH、CYP27A1、LXRα、CYP8B1、CYP7A1、AKR1D1 和 ABCB11 表達，同時顯著降低 CYP7B1、ABCG8、PLTP 和 PLIN2 表達（圖 5A、5B）。

圖 5. H4 通過調控 PPAR 信號通路相關蛋白緩解小鼠 MASLD

(A) 采用 q-PCR 檢測不同組中 FXR、SHP、SREBP-1C、CYP7A1、CD36、EHHADH、CYP8B1、ACADM、CYP4A10、CYP4A14、CPT1A 和 ABCG8 的表達水平。
*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001，與 HFD 組相比。p < 0.05 表示差異具有統計學意義；n.s. 表示無顯著性差異。
(B) 采用 Western blot 檢測不同組中 PPARα、PLTP、PLIN2、CYP7A1、FXR、AKR1D1、CYP7B1、ABCB11、ABCG8、CPT1A、CPT2、EHHADH、CYP27A1、LXRα 和 CYP8B1 的表達水平。結果以平均值 ± 標準差表示（n = 8）。
*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001，與 HFD 組相比。p < 0.05 表示差異具有統計學意義；n.s. 表示無顯著性差異。

這些結果表明，H4 可通過 PPAR 信號通路調控脂質代謝，從而改善高脂飲食誘導的 MASLD。基于這些結果，研究者推測 H4 的靶標可能是 PPAR 信號通路中的關鍵上游蛋白。

Sabinineoside B 通過調節 PPAR 信號通路減少 HepG2 細胞脂質積累（圖 6A–E）

為探究 H4 緩解 MASLD 的作用靶點，研究者采用 CCK-8 實驗確定不影響 HepG2 細胞活力的 H4 和 PA/OA 最佳濃度。結果顯示，PA/OA 組在 1200 μM 時表現出顯著毒性；相比之下，H4 在 200 μM 以下無明顯毒性（圖 6A）。

圖 6. H4 減少 PA 和 OA 刺激的 HepG2 細胞中的脂質積累

(A) PA/OA 和 H4 對 HepG2 細胞的細胞毒性。
(B) HepG2 細胞經 PA 和 OA 處理 24 小時后，H4（20、40 和 80 μM）處理下的 TG 含量檢測。
(C) 指定組別 HepG2 細胞的代表性油紅 O 染色圖像，放大倍數為 40×。
(D) PA 和 OA 誘導的 HepG2 高脂細胞模型中，PPARα、CPT1A、LXRα、FASN、PLTP、PLIN2 和 SREBP-1C 的 mRNA 表達結果。結果以平均值 ± 標準差表示。
*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001，與 HFD 組相比。p < 0.05 表示差異具有統計學意義；n.s. 表示無顯著性差異。
(E) 采用 Western blot 檢測不同組中 PPARα、CYP7A1、FXR、CPT1A、LXRα、FASN 和 CYP8B1 的表達水平。結果以平均值 ± 標準差表示。
*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001，與 HFD 組相比。p < 0.05 表示差異具有統計學意義；n.s. 表示無顯著性差異。

H4 能顯著降低 PA/OA 誘導的高脂細胞中甘油三酯水平（圖 6B）。油紅 O 染色結果顯示，H4 可減少細胞內脂滴積累（圖 6C）。q-PCR 分析表明，H4 顯著上調脂質代謝相關基因，如 CPT1A 和 LXRα 的 mRNA 表達，同時降低脂肪酸合成相關基因 FASN、脂質轉運相關基因 PLTP 以及脂肪細胞分化相關基因 PLIN2 的表達（圖 6D）。

與此同時，Western blot 分析顯示，H4 顯著調控 PPARα 下游脂質相關蛋白，包括 CPT1A、LXRα、CYP7A1、CYP8B1、FXR 和 FASN 的表達水平（圖 6E）。

Sabinineoside B 可直接結合 PPARα 蛋白（圖 7A–S）

確定小分子靶標對于闡明其作用機制至關重要。分子對接結果顯示，H4 配體能夠穩定結合于 PPARα 激動劑結合口袋中，并表現出良好的空間互補性（圖 7A）。在最佳結合構象中，H4 通過形成兩個關鍵氫鍵與受體殘基 THR-279 和 TYR-334 相互作用。THR-279 位于結合口袋下方的 α 螺旋區域，TYR-334 位于結合口袋側壁，兩者為配體提供關鍵的方向定位和穩定作用。

圖 7. H4 直接與 PPARα 相互作用并激活 PPARα

(A) 分子對接預測 H4 與 PPARα 的結合。
(B–O) 分子動力學模擬結果，包括 RMSD（B）、SASA（C）、氫鍵數量（D）、RMSF（E）、Rg（F）、結合能（G）、配體與關鍵殘基 ALA-333 和 TYR-334 之間距離隨時間的變化（H）、配體與三類二級結構區域（Alpha-up、Alpha-down 和 Beta）質心距離的時間演化（I）、自由能景觀（FEL）分析（J 和 K）、代表性構象（L），以及各能量谷中的代表性構象（M、N 和 O）。
(P) 使用 H4 進行 EAS6B 磁珠 pull-down 樣品的 Western blot 分析。
(Q) CETSA 分析 H4 對 PPARα 熱穩定性的影響。
(R) DARTS 分析 H4 對 PPARα 酶穩定性的影響。
(S) 雙熒光素酶報告實驗評估不同濃度 H4 對 PPARα 轉錄活性的激活作用。
(P–S) 每組 n = 3。數據以平均值 ± 標準差表示。*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001；“ns”表示無顯著性差異。

進一步結構分析顯示，H4 的結合受到三個二級結構元件的協同限制和促進。Alpha-down 區域從下方支撐配體并參與氫鍵網絡形成；Alpha-up 區域從上方覆蓋結合口袋，限制并穩定配體構象；Beta 區域形成結合口袋的一側邊界，并與配體發生緊密的疏水和空間接觸。這種由 Alpha-up、Alpha-down 和 Beta 結構元件共同限制的結合模式，為 H4 穩定結合于 PPARα 激動劑口袋提供了結構基礎。

分子動力學模擬結果顯示，該體系在最初 50–80 ns 內發生構象調整并迅速收斂。在隨后 500 ns 模擬過程中，均方根偏差（RMSD）穩定在約 2.0 ?，表明 PPARα-H4 對接復合物整體構象穩定（圖 7B）。相應地，溶劑可及表面積（SASA）在模擬過程中保持相對穩定，未出現顯著結構暴露或塌陷，進一步支持體系構象穩定性（圖 7C）。

氫鍵分析顯示，初始階段配體和受體之間主要形成兩個穩定氫鍵；隨后在短時間尺度上短暫形成第三個氫鍵，但該氫鍵缺乏長期穩定性，并在約 200 ns 前恢復為以兩個主要氫鍵為主的結合模式（圖 7D）。這提示氫鍵數量波動反映的是結合口袋內的細微構象調整，而非配體結合模式的根本改變。

RMSF 分析顯示，多數殘基波動幅度較低，僅部分環區和蛋白末端表現出較高靈活性；與配體結合相關的口袋區域整體保持高度剛性，有利于配體穩定結合（圖 7E）。回轉半徑（Rg）在整個模擬過程中僅出現輕微波動，表明蛋白整體緊密性保持良好（圖 7F）。

基于 gmx_MMPBSA 模塊的能量分解分析顯示，多個疏水口袋殘基，如 MET-220、VAL-255、ILE-339 和 VAL-312，對結合自由能貢獻較大，提示疏水相互作用是 H4 穩定結合的主要驅動力（圖 7G）。相比之下，ALA-333 和 TYR-334 形成的氫鍵對總結合自由能貢獻較小，其作用更可能在于引導和局部穩定結合構象，而非作為主要能量貢獻因素。

配體與關鍵殘基 ALA-333 和 TYR-334 之間的距離在整個模擬過程中保持穩定，支持 TYR-334 在對接及后續動力學過程中的關鍵錨定作用（圖 7H）。配體質心與三個二級結構區域 Alpha-up、Alpha-down 和 Beta 之間距離的時間演變顯示，配體始終穩定包裹于這些結構區域中，未出現明顯解離或大尺度位移（圖 7I）。值得注意的是，Beta 區域與配體之間的平均距離最短，并且體系中觀察到的兩個關鍵氫鍵均位于該區域。因此，研究者認為 Beta 區域在 H4 穩定結合 PPARα 過程中發揮核心結構支撐作用。

自由能景觀分析顯示，在 500 ns 模擬過程中，PPARα-H4 體系主要采樣到三個穩定構象能谷（Basins M–O）（圖 7J、7K）。對應代表構象顯示，H4 配體始終限制在激動劑結合口袋區域內（圖 7L）。進一步比較各能谷代表構象發現，在模擬初期和末期，H4 與 TYR-334 和 ALA-333 形成氫鍵相互作用；但在中間能谷中，該氫鍵網絡短暫減弱或消失，并伴隨配體在口袋內發生輕微重新定向。需要注意的是，該氫鍵比較基于靜態構象，與時間序列氫鍵統計結果在細節上存在一定差異（圖 7D）。

Pull-down 實驗顯示，H4 主要與 PPARα 發生結合，而與 PPARβ 和 PPARγ 的相互作用明顯較弱或幾乎可以忽略，說明其具有結合選擇性（圖 7P）。CETSA 分析顯示，H4 與 PPARα 蛋白結合后降低了其熱穩定性，提示 H4 與 PPARα 存在直接相互作用（圖 7Q）。DARTS 實驗證實，H4 促進酶誘導的 PPARα 降解（圖 7R）。雙熒光素酶報告基因實驗確認，H4 對 PPARα 具有較弱的轉錄激活作用（圖 7S）。以上結果共同證實，H4 能夠直接結合 PPARα 蛋白。

Sabinineoside B 對肝細胞脂質積累的保護作用依賴于 PPARα 激活（圖 8A–E）

為探究 H4 是否通過依賴 PPARα 激活發揮肝保護作用，研究者使用 siRNA 在 HepG2 細胞中敲低 PPARα。油紅 O 染色結果顯示，PPARα 敲低后，H4 降低脂滴積累的能力幾乎被完全消除（圖 8A）。此外，H4 處理可顯著降低細胞內 TG 水平，但該作用被 PPARα siRNA 削弱（圖 8B）。

圖 8. H4 對肝細胞脂質積累的保護作用歸因于 PPARα 激活

(A) 在有無 PPARα siRNA 的條件下，觀察 HepG2 細胞經 OA 和 PA 刺激前后的代表性油紅 O（ORO）染色圖像。放大倍數為 40×。*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001；“ns”表示無顯著性差異。
(B) 在有無 PPARα siRNA 的條件下，HepG2 細胞經 PA 和 OA 刺激前后的 TG 含量。*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001；“ns”表示無顯著性差異。
(C) HepG2 細胞中脂質代謝相關分子的 mRNA 水平。每組 n = 3。數據以平均值 ± 標準差表示。*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001；“ns”表示無顯著性差異。
(D) 通過 Western blot 分析表達蛋白，驗證轉染效率。每組 n = 3。數據以平均值 ± 標準差表示。*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001；“ns”表示無顯著性差異。
(E) PPARα siRNA 條件下 HepG2 細胞中脂質代謝相關分子的蛋白水平。每組 n = 3。數據以平均值 ± 標準差表示。*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001；“ns”表示無顯著性差異。

為進一步考察 PPARα 是否在 H4 降脂作用中發揮關鍵作用，研究者進行了 q-PCR 分析。結果顯示，在高脂細胞模型中，PPARα siRNA 會削弱 H4 對脂質代謝相關基因 CPT1A 和 LXRα 的調控作用（圖 8C）。同時，PPARα 敲低顯著影響 H4 對 PPARα 下游脂質代謝通路靶蛋白 LXRα、CPT1A、CYP7A1、CYP8B1 和 FXR 水平的調控作用（圖 8D、8E）。這些結果提示，在 PA/OA 刺激下，PPARα 缺失會抵消 H4 對脂質積累的保護作用。

Sabinineoside B 在大鼠體內的藥代動力學（補充表 6，補充圖 4）

研究者采用 LC-MS 測定血漿中 H4 濃度，并利用 DAS 3.0 軟件處理數據，計算大鼠體內藥代動力學參數。經灌胃給予 H4 2.1、7.0 和 21.0 mg/kg，以及經尾靜脈注射給予 3.0 mg/kg 后測得的血漿濃度分別見補充表 6-1 至 6-4；對應藥代動力學參數匯總于補充表 6-5 和 6-6。三種口服劑量和單次靜脈給藥后的平均血藥濃度-時間曲線見補充圖 4。

Cmax 和 AUC 與給藥劑量的回歸分析顯示，Cmax、AUC(0-t) 和 AUC(0-∞) 與劑量之間呈線性關系。結果表明，在 2.1–21 mg/kg 劑量范圍內，峰濃度 Cmax 和系統暴露量 AUC 均與劑量呈正相關，提示 H4 具有劑量依賴性藥代動力學特征。根據 2.1 mg/kg 灌胃給藥和 3.0 mg/kg 靜脈注射后獲得的 AUC(0-∞) 值計算，H4 的絕對生物利用度為 3.23%。

Sabinineoside B 在小鼠中的急性毒性評價（補充圖 5）

給藥后 7 天內，各組小鼠均未發生死亡。與對照組相比，H4 低劑量組和高劑量組小鼠體重無顯著差異（補充圖 5A）。各組小鼠器官均未觀察到異常病理改變。除腎臟外，給藥組其他器官指數與對照組相比無統計學差異（補充圖 5B）。此外，給藥組各器官組織病理染色均未發現異常變化（補充圖 5C）。

【Citation】:Feng Y, Chen R, Li Y, et al. Sabinineoside B alleviates metabolic dysfunction-associated steatotic liver disease by targeting PPAR α.Commun Biol. Published online April 21,2026.

【貢獻】★★★★★

H4 通過靶向 PPARα 調節脂質代謝，表現出降脂作用。這些發現提示，H4 可能作為一種潛在的 PPARα 配體，緩解早期 MASLD。本研究為天然產物治療 MASLD 的有效性提供了更廣闊的前景，并強調了靶向 PPARα 治療 MASLD 的潛在價值。

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Guest Editor I Huihui Shao (Perking University)

Executive Editor I Tao Pang (Tongji University)