廣東
近日，山東農(nóng)業(yè)大學園藝科學與工程學院包志龍教授、馬方放教授團隊在番茄褪綠病毒（Tomato chlorosis virus, ToCV）研究領域取得突破，成功構(gòu)建了可直接侵染番茄的ToCV高效侵染體系，相關(guān)研究成果以“Integrating the tomato chlorosis virus with the tobacco rattle virus facilitates the direct infection of tomato”為題，發(fā)表于《Plant Physiology》期刊，為抗ToCV番茄育種提供了全新技術(shù)支撐。園藝科學與工程學院已畢業(yè)2026屆博士王歌（現(xiàn)為聊城大學講師）、已畢業(yè)碩士卞玉梅以及在讀研究生劉碩和孫鳳澤為論文共同第一作者，包志龍教授、馬方放教授為論文共同通訊作者。
該研究將ToCV的全基因組（包括RNA1和RNA2）分別克隆并整合到弱毒煙草脆裂病毒（Tobacco rattle virus, TRV）載體pTRV2GW中，構(gòu)建了ToCV侵染性克隆。研究人員將pTRV1、pTRV2GW-RNA1和pTRV2GW-RNA2的農(nóng)桿菌懸浮液等體積混合，通過無針注射器侵染番茄子葉，成功實現(xiàn)了ToCV對番茄的直接侵染。RT-PCR、Western blot及透射電鏡檢測證實，侵染后番茄植株中可檢測到ToCV的ORF3和ORF10，且葉片中出現(xiàn)明顯的病毒顆粒聚集，表明侵染體系構(gòu)建成功。進一步研究發(fā)現(xiàn)，接種該侵染性克隆的番茄植株表現(xiàn)出ToCV典型病害癥狀，與自然侵染癥狀完全一致。該體系可高效用于番茄抗ToCV資源的快速篩選，有效區(qū)分易感番茄品種與抗病野生番茄資源。
該研究借助弱毒TRV載體復制效率高、宿主范圍廣的優(yōu)勢，攻克了傳統(tǒng)ToCV侵染性克隆不能直接侵染番茄的技術(shù)難題，建立起簡便高效的病毒侵染體系。擺脫了對煙粉虱傳毒和嫁接接種的依賴，操作更簡便、周期更短，可為ToCV致病機理研究提供有效技術(shù)手段；同時本研究建立的弱毒病毒載體整合外源病毒基因組技術(shù)策略，也為其他缺乏侵染性克隆的病毒研究提供了參考思路。
論文鏈接：
https://doi.org/10.1093/plphys/kiag260
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